ΓΙΑΤΙ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΣΗ ΤΟΥ ΑΝΟΣΟΦΘΟΡΙΣΜΟΥ ΓΙΑ ΤΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΥΤΟΑΝΟΣΩΝ ΔΙΑΤΑΡΑΧΩΝ

Η διαλεύκανση των ύποπτων ρευματικών συμπτωμάτων επιτυγχάνεται κυρίως μέσω ορολογικής αξιολόγησης / εντοπισμού αυτοαντισωμάτων που αφορούν συγκεκριμένες νόσους (π.χ. αντιπυρηνικά αντισώματα, ANA).

Παρά την ανάπτυξη της δοκιμασίας ELISA και των υπολοίπων εναλλακτικών μεθόδων ή τεχνολογιών, ο έλεγχος για ANA μέσω δοκιμασιών IIF παραμένει η βασική μέθοδος στη σύγχρονη διαγνωστική προσέγγιση για τις συστηματικές ρευματικές διαταραχές, όπως ο συστηματικός ερυθηματώδης λύκος (SLE), το σύνδρομο Sjögren (SS), η προοδευτική συστηματική σκλήρυνση (PSS), η δερματομυοσίτιδα – πολυμυοσίτιδα (DM/PM) ή η μικτή νόσος του συνδετικού ιστού (MCTD).

Οι διεθνείς κατευθυντήριες οδηγίες συνιστούν τη διενέργεια ελέγχου για ΑΝΑ στα ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα (ΗΕp-2). Άλλα κυτταρικά υποστρώματα, όπως το Crithidia luciliae (για τον εντοπισμό των αυτοαντισωμάτων στο dsDNA) και τα ανθρώπινα κοκκιοκύτταρα (για τον εντοπισμό των αντι-ουδετερόφιλων κυτταροπλασματικών αυτοαντισωμάτων, ANCA), χρησιμοποιούνται τακτικά στις διαδικασίες ΙIF.

Καθώς τα αυτοαντισώματα παράγουν χαρακτηριστικά φθορίζοντα μοτίβα, των οποίων η αξιολόγηση εξαρτάται από τη γνώση και τις υποκειμενικές ερμηνείες των ερευνητών, η υψηλή ενδο-εργαστηριακή- και δι-εργαστηριακή διακύμανση αποτελεί ένα σημαντικό πρόβλημα στη διάγνωση των αυτοάνοσων νόσων.

Η αύξηση του φόρτου εργασίας και η ανάγκη για τυποποιημένη και αναπαραγώγιμη αξιολόγηση των δοκιμασιών IIF σε κύτταρα έχουν οδηγήσει τα εργαστήρια αυτοανοσολογίας στην αυτοματοποίηση.

Το νέο σύστημα Zenit G Sight της A. Menarini Diagnostics έχει σχεδιαστεί συγκεκριμένα ώστε να αντιμετωπίζει τα θέματα που αφορούν τις δοκιμασίες IIF, όντας έτσι εξαιρετικά κατάλληλο για αυτοματοποιημένη ορολογική διάγνωση αυτοάνοσων νόσων στο τυπικό εργαστηριακό περιβάλλον.

Τα βασικά στάδια της μεθόδου είναι τα εξής:

1. Diluição das amostras de soro (por ex. 1:80) e incubação no substrato fixado na lâmina por 30 min em câmara húmida à TA.
2. Επώαση με αντι-ανθρώπινη lgG προβάτου συζευγμένη με ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου
3. Αξιολόγηση: Οπτική ή αυτοματοποιημένη ανάλυση των αντικειμενοφόρων πλακών

Η παρουσία ANA σε κύτταρα HEp-2 δημιουργεί συγκεκριμένα μοτίβα φθορισμού. Τα πέντε βασικά μοτίβα που μπορούν να εντοπιστούν είναι τα ακόλουθα

*Εμφανίζονται τα μοτίβα φθορισμού των ΑΝΑ σε κύτταρα ΗΕp-2 καθώς αυτή είναι η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη δοκιμασία για τον οπτικό / αυτοματοποιημένο έλεγχο για ρευματικές νόσους.

Η δοκιμασία IIF είναι μια οικονομική, απλή και γρήγορη μέθοδος διαλογής για έλεγχο για αυτοάνοσες διαταραχές – ωστόσο, έχει ορισμένα μειονεκτήματα, τα οποία μπορούν εύκολα να αντιμετωπιστούν με το Zenit G Sight.

• Υποκειμενική ανάλυση
• Περιορισμένος αριθμός δειγμάτων
• Χρονοβόρα εξέταση δειγμάτων
• Αλλοίωση του φθοριοχρώματος
• Απαιτείται οργανωμένος χώρος αρχειοθέτησης
• Δυσκολία στην ανταλλαγή αποτελεσμάτων με άλλα εργαστήρια

• Αντικειμενική ποσοτικοποίηση και αναγνώριση μοτίβων
• Διαχείριση υψηλού φόρτου εργασίας
• Αποδοτική αυτοματοποιημένη διάκριση +/- ορών
• Ψηφιοποιημένα δεδομένα εικόνων
• Αποθήκευση αρχείων και εύκολη ανάκτηση παλαιότερων αναφορών
• Πρόσβαση και ανταλλαγή δεδομένων μέσω δικτύου

• Πολύτιμο και ακριβές
  διαγνωστικό βοήθημα για τους κλινικούς ιατρούς, παρέχοντας μια πλήρη ποσοτική / ποιοτική αναφορά σχετικά με την ορολογική κατάσταση των αυτοαντισωμάτων
• Αξιόπιστο
  παρέχοντας αποτελέσματα που είναι αναπαραγώγιμα και συγκρίσιμα εντός του ίδιου εργαστηρίου ή μεταξύ διαφορετικών εργαστηρίων
• Οικονομικά αποδοτικό
  αντιμετωπίζοντας το μεγάλο φόρτο εργασίας των εργαστηρίων που χειρίζονται μεγάλους αριθμούς δειγμάτων, μεγιστοποιώντας την αποδοτικότητα και βελτιστοποιώντας την χρήση των ανθρώπινων πόρων
• Ασφαλές
  προστατεύοντας τα αποτελέσματα και βελτιώνοντας τη διαχείριση των δεδομένων

Το υλικό ελέγχεται πλήρως από λογισμικό το οποίο αφορά κυρίως τη διαδικασία λήψης ψηφιακών εικόνων.

• Μικροσκόπιο φθορισμού
  Το μικροσκόπιο του Zenit G Sight είναι εξοπλισμένο με έναν υψηλής απόδοσης μηχανισμό αυτόματης εστίασης (5 ως 13 σημεία εστίασης ανά πηγαδάκι) και παρέχεται με δυο αντικειμενικούς φακούς (4x, 40x), σε περιστρεφόμενο πυργίσκο.
  Πρόσθετοι αντικειμενικοί φακοί διατίθενται κατόπιν παραγγελίας (ο περιστρεφόμενος πυργίσκος μπορεί να φιλοξενήσει έως 6 αντικειμενικούς φακούς).

• Πηγή φωτός LED
  Η τεχνολογία φωτισμού LED έχει πολυάριθμα πλεονεκτήματα έναντι των συμβατικών πηγών φωτισμού: Για παράδειγμα, παρέχει φωτεινή δέσμη υψηλής εστίασης, παράγει χαμηλά ποσά θερμότητας και ουσιαστικά δεν απαιτεί συντήρηση (φωτεινή πηγή μεγάλης διάρκειας ζωής). Επίσης, οι φωτεινές πηγές LED δεν προκαλούν φωτολεύκανση στα μόρια FITC με την ίδια ταχύτητα των λυχνιών υδραργύρου.

• Τράπεζα σάρωσης
  Η τράπεζα σάρωσης με αυτοματοποιημένη κίνηση στους άξονες X-Y του Zenit G Sight χωρά έως και 5 πλάκες (οι οποίες περιέχουν διάφορους αριθμούς πηγαδιών) και είναι εξοπλισμένη με αναγνώστη γραμμωτού κωδικού. Για μέγιστη ακρίβεια, σαρώνεται μια μεγάλη περιοχή (από 1 ως 220 πεδία ανά πηγαδάκι) – συνεπώς, ο μέσος χρόνος σάρωσης για μια πλάκα με 14 πηγαδάκια μπορεί να κυμαίνεται από 30 έως 60 λεπτά.
  
  
• Ψηφιακή φωτογραφική μηχανή
  Η φωτογραφική μηχανή με τον υψηλής ευαισθησίας αισθητήρα CCD του Zenit G Sight λαμβάνει καθαρές εικόνες φθορισμού υψηλής αντίθεσης.