|
ΓΙΑΤΙ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΣΗ ΤΟΥ ΑΝΟΣΟΦΘΟΡΙΣΜΟΥ ΓΙΑ ΤΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΥΤΟΑΝΟΣΩΝ ΔΙΑΤΑΡΑΧΩΝ
Η διαλεύκανση των ύποπτων ρευματικών συμπτωμάτων επιτυγχάνεται κυρίως μέσω ορολογικής αξιολόγησης / εντοπισμού αυτοαντισωμάτων που αφορούν συγκεκριμένες νόσους (π.χ. αντιπυρηνικά αντισώματα, ANA).
Παρά την ανάπτυξη της δοκιμασίας ELISA και των υπολοίπων εναλλακτικών μεθόδων ή τεχνολογιών, ο έλεγχος για ANA μέσω δοκιμασιών IIF παραμένει η βασική μέθοδος στη σύγχρονη διαγνωστική προσέγγιση για τις συστηματικές ρευματικές διαταραχές, όπως ο συστηματικός ερυθηματώδης λύκος (SLE), το σύνδρομο Sjögren (SS), η προοδευτική συστηματική σκλήρυνση (PSS), η δερματομυοσίτιδα – πολυμυοσίτιδα (DM/PM) ή η μικτή νόσος του συνδετικού ιστού (MCTD).
Οι διεθνείς κατευθυντήριες οδηγίες συνιστούν τη διενέργεια ελέγχου για ΑΝΑ στα ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα (ΗΕp-2). Άλλα κυτταρικά υποστρώματα, όπως το Crithidia luciliae (για τον εντοπισμό των αυτοαντισωμάτων στο dsDNA) και τα ανθρώπινα κοκκιοκύτταρα (για τον εντοπισμό των αντι-ουδετερόφιλων κυτταροπλασματικών αυτοαντισωμάτων, ANCA), χρησιμοποιούνται τακτικά στις διαδικασίες ΙIF.
Καθώς τα αυτοαντισώματα παράγουν χαρακτηριστικά φθορίζοντα μοτίβα, των οποίων η αξιολόγηση εξαρτάται από τη γνώση και τις υποκειμενικές ερμηνείες των ερευνητών, η υψηλή ενδο-εργαστηριακή- και δι-εργαστηριακή διακύμανση αποτελεί ένα σημαντικό πρόβλημα στη διάγνωση των αυτοάνοσων νόσων.
Η αύξηση του φόρτου εργασίας και η ανάγκη για τυποποιημένη και αναπαραγώγιμη αξιολόγηση των δοκιμασιών IIF σε κύτταρα έχουν οδηγήσει τα εργαστήρια αυτοανοσολογίας στην αυτοματοποίηση.
Το νέο σύστημα Zenit G Sight της A. Menarini Diagnostics έχει σχεδιαστεί συγκεκριμένα ώστε να αντιμετωπίζει τα θέματα που αφορούν τις δοκιμασίες IIF, όντας έτσι εξαιρετικά κατάλληλο για αυτοματοποιημένη ορολογική διάγνωση αυτοάνοσων νόσων στο τυπικό εργαστηριακό περιβάλλον.
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΔΟΚΙΜΑΣΙΑΣ IIF
Τα βασικά στάδια της μεθόδου είναι τα εξής:
|
1
|
Διάλυμα δείγματος ορού (π.χ. 1:80) και επώαση με υπόστρωμα σε αντικειμενοφόρες πλάκες γυαλιού για 30 λεπτά σε επωαστικό κλίβανο σε θερμοκρασία δωματίου
|
2
|
Επώαση με αντι-ανθρώπινη lgG προβάτου συζευγμένη με ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου
|
3
|
Αξιολόγηση: Οπτική ή αυτοματοποιημένη ανάλυση των αντικειμενοφόρων πλακών
|
|
|
|
|
|
|
|
ΜΟΤΙΒΑ IIF*
Η παρουσία ANA σε κύτταρα HEp-2 δημιουργεί συγκεκριμένα μοτίβα φθορισμού. Τα πέντε βασικά μοτίβα που μπορούν να εντοπιστούν είναι τα ακόλουθα:
|
|
|
|
|
Ομοιογενές/
Περιφερικό |
Πυρηνισκικό |
Στικτό |
Κεντρομεριδιακό |
Κυτταροπλασματικό/
Μιτοχονδριακό |
*Εμφανίζονται τα μοτίβα φθορισμού των ΑΝΑ σε κύτταρα ΗΕp-2 καθώς αυτή είναι η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη δοκιμασία για τον οπτικό / αυτοματοποιημένο έλεγχο για ρευματικές νόσους.
|